利巴韦林专用色谱柱
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色谱柱 信息
Carbomix Na-NP 柱专为糖类、醇类的高效分离而设计。 该新型填料是在低交联度聚苯乙烯/二乙烯苯(PS/DVB)颗粒 的表面修饰磺酸基团(-SO3H)得到 Carbomix H-NP,并在此 基础上进一步螯合钠离子(Na+ )得到的。极窄的粒径分布 确保了高的分离效率,而较低的交联度则保证其可以在流动 相中发生溶胀,从而具有合适的比表面积和柱容量。图 1 是使用 Carbomix Na-NP10 柱分离糖及糖醇混合物得到的一 张色谱图
分离机理
Carbomix Na-NP 固定相的分离机理包括离子交换作用 以及与待测物亲水相互作用。此外还涉及了体积排阻、离子 排斥、配体交换等机理。多种相互作用模式使 Carbomix Na-NP 柱具备分离多种水溶性化合物的独特能力。在分离中 树脂交联度是一个重要参数。PS/DVB 树脂是一种相对坚硬 的凝胶介质。交联度越低,孔结构就越容易溶胀,也就越利 于大分子化合物的渗透。因此,交联度 5%的 Carbomix 树脂 比 10%交联度的树脂更适合于分离大分子量的低聚糖。小分 子量的化合物可用 8%交联度的 Carbomix 树脂进行分离。
色谱柱 参数
我们可提供多种规格的 Carbomix Na-NP 柱,内径从 75 μm 到 21.2 mm,长度从 5 cm 到 30 cm 不等。此外还可根据 客户的要求定制色谱柱。色谱柱的长度和内径会影响分离的 效果以及分析所需的时间。因此,在选择 Carbomix 柱的规 格时,一定要保证选用的色谱柱内的树脂量恰好能够达到所 需要的分离效果。如果化合物在树脂上保留过强,例如,在 7.8×300 mm 柱子上保留时间太长时,可选用短的柱子如 150 mm 色谱柱来缩短分析的时间。
色谱柱操作
样品制备 Carbomix Na-NP 柱适合分离中性样品,请务必将 待分析样品的 pH 控制在 5-9 范围内,并经 0.45 μm 滤膜过 滤后,再进样。
图 1 在 Carbomix Na-NP5 (5 μm, 8%交联度, 7.8×300 mm) 柱上进行糖及糖醇混合物的分离
流动相:超纯水
流速:0.5 mL/min
柱温:75 ℃
进样量:5 µL
检测器:示差折光检测器
样品: 纤维二糖 (Cellobiose)
2. 葡萄糖 (Glucose)
3. 阿拉伯糖(Arabinose)
4. 核糖 (Ribose)
溶剂
简单的溶剂选择和等度洗脱方式是使用 Carbomix 柱 的一个主要特色。Carbomix Na-NP 柱建议流动相为 18 M? 超纯水,其适用的 pH 范围为 5-9。大多数糖类化合物在 Carbomix Na-NP 柱上的分离都可以用超纯水作为流动相。 在某些特殊情况下, 流动相中添加有机溶剂如乙腈等能够 改善糖醇等化合物的分离度。另一方面,流动相中加入有机 溶剂也可作为改性剂减少有机化合物在固定相上的保留。建 议流动相中有机改性剂的含量应不高于 30%乙腈或低于 5% 叔丁醇(或异丙醇)。加入改性剂在芳香酸类化合物的分离 中特别有效。有机改性剂可以用于减少分析的时间,但也可 能因渗入 PS/DVB 使其溶胀从而改变树脂的容积。乙醇和异 丙醇与乙腈的性质相似。不推荐使用甲醇、四氢呋喃、二甲基甲酰胺以及其它非极性溶剂,因为它们可能会使柱床发生 收缩或溶胀。在色谱柱的使用过程中,强烈建议采用在线脱 气的方法。
温度
温度对 Carbomix Na-NP 柱的分离性能有着显著影 响。柱温会影响保留时间和分离效率。对于某一特定分析而 言,温度所产生的影响取决于该分析所涉及的化学特性、填 料类型、流动相等。但对大多数应用而言,随着柱温的升高 保留时间将会缩短,柱效将会提高,同时柱压会随之降低。 升高温度可减少固定相中慢传质过程所引起的谱带展宽效 应,从而可提高分离的效率。此外,升高温度还能减小流动 相的粘度,使溶质分子更容易地渗入树脂内部,从而可以获 得高的分辨率。因此,控制温度对于精确的定性及定量分析 都非常重要。注意:Carbomix Na-NP 柱的建议柱温为 85 ℃。 用户可根据分离情况对柱温进行优化,但需保证在 Carbomix Na-NP 柱的工作温度范围内,超出温度上限 (80℃)或低于下限(50 ℃)都将可能对色谱柱造成损伤。
流速
由于合成的 Carbomix 介质交联度较低,Carbomix 树脂更像软凝胶,在高流速下会产生高柱压(Carbomix 柱 工作压力上限请参见技术参数表)。Carbomix Na-NP 通常在 低流速下使用。尽管低流速会增加分析的时间,但这将有助 于提高色谱柱的柱效。在某些应用中, 低的操作流速还允 许将 2-3 根色谱柱串联起来,可用于分离和检测复杂样品中 的组分。在常规分析中, 对规格为 7.8×300 mm 和 4.6×300 mm 的 Carbomix 色谱柱而言,其建议使用流速分别为 0.4-0.8 mL/min 和 0.1-0.3 mL/min 流速(取决于交联度),以获得最 佳的分离效果和保留时间.
pH 为了获得最佳的分离效果和延长柱的使用寿命, Carbomix Na-NP 柱的 pH 适用范围是 5-9。如使用了超出上 述 pH 范围的流动相,将可能对色谱柱造成不可修复的损伤。 如特殊情况下需要使用 Carbomix Na-NP 柱来分析酸性样 品,则务必在进样前对样品进行预处理,以保证其 pH 在 5-9 的中性范围内,方可进样。
安全注意事项
Carbomix 柱通常在中等压力下运行。如果管路连接不 紧,将会导致有机溶剂和注入样品的泄漏,从而对操作人员 的健康产生影响。一旦发生泄漏,应佩戴适当的手套进行处 理。另外当打开色谱柱时还应采取适当的保护措施,以防止 微小的填料颗粒进入呼吸道色谱柱安装与操作 色谱柱在运输过程中或在没有使用时,它的两端总是用堵头进行密封。当将色谱柱接入色谱仪器系统时,首先移 去两端的堵头。请注意将流动相流动的方向与柱上标记的方 向保持一致。除非出于特殊考虑,例如为了清除堵在色谱柱 入口端的脏污等而需要将色谱柱反接以进行冲洗时,建议用 户在接上色谱柱时一定要遵循柱上标记的方向。由于色谱柱 的连接是整个色谱操作过程的一部分,如果密封卡套过紧, 或安装不合适,或者密封卡套与色谱柱端口不匹配,都有可 能导致溶液的泄漏。请按照下面步骤将色谱柱与密封卡套相 连接,从而将色谱柱接入 HPLC 系统: (a)第一次使用的管线,请依次将管线接头和密封卡套装 在外径 1/16”的管线上。密封卡套的宽口端应朝向管线接头。 由于 Carbomix 色谱柱的使用温度通常较高,因此色谱柱前 的连接管线推荐使用 50 cm 以上长度的金属管线,以保证流 动相在进入色谱柱前被充分预热。 (b)将管线紧紧插入色谱柱的接口,向前滑动密封卡套和 管线接头,并使管线接头的螺纹与色谱柱端口的螺纹相互衔 接,然后拧紧管线接头。如果管线为高分子材料,请转到步 骤(d);如果是金属管线,请继续(c)。 (c)在用力将管线压入柱端接口之后,用 1/4”扳手将已拧 紧的螺帽再进一步紧固。 (d)对色谱柱的另一端采用上述方法进行操作。 (e)连接好管线后,先设定流速为 0.1 mL/min,待柱温升 至设定温度后再逐渐升高流速至设定值。 (f)使用结束后,先将流速设定为 0.1 mL/min,再降低柱 温至 40 ℃以下后,方可取下色谱柱
运输溶剂 新的Carbomix Na-NP柱保存在超纯水中。在储存 和运输过程中,柱填料可能会干涸。这时推荐用10-20倍柱 体积的保存溶剂进行冲洗以活化色谱柱。接着可用用户自己 选择的流动相冲洗色谱柱。流速由0.1 mL/min逐渐升至所需 的操作条件,直至基线稳定为止。(建议整个操作过程均待 温度升至50 ℃以上、压力稳定时进行)。 储存 长期不用时,Carbomix Na-NP 柱保存在超纯水中。 每根色谱柱在运输过程中均会附有两个可拆卸的堵头。为了 防止柱床干涸,请用堵头塞紧色谱柱的两端。
典型应用 Carbomix Na-NP 树脂基质色谱柱为食品和饮料中糖 类、醇类等的分离,以及生物化学、生物医药、生物技术等 方面的应用提供了许多便利。 醇类分析涉及糖类与乙醇、乙二醇和发酵产品等的分 离。 糖类分析样品包括甜菜糖、糖蜜、玉米糖浆、戊糖、纤 维素水解物、寡糖、葡萄糖、半乳糖、蔗糖、果糖等
产品规格